RNA提取又不合格?那你一定需要了解这些~

师弟，周末一起看电影呗，xxxx很不错，网评超高的。

哎~别提了，最近实验很不顺利，啥心情都没有了

什么情况？师姐很厉害，可以来解救你哦~

之前千辛万苦提的RNA又降解了，这已经是第八次啦，好心塞

就这事啊，我帮你搞定，我提RNA杠杠滴......

你是不是和上面的师弟有一样的苦恼，搞不定RNA这个磨人的小妖精，经常出现辛辛苦苦提的RNA又降解了，质检又没通过的情况。为什么提的RNA总是不合格？ 今天小编就给大家梳理一下RNA提取时的注意事项，轻松帮你搞定傲娇的RNA分子，So easy~

为什么RNA易降解？

RNA容易降解有内因也有外因，从自身结构来说RNA是单链分子，本身很不稳定，另外RNA分子2’位置上有游离的羟基，易形成2’，3’-环形磷酸盐中间产物，易分解。从外因来看RNase无处不在，并且RNase本身热稳定性高、不容易失活。RNase就像顽强的小强，怎么打都不死。

RNA提取注意事项

Point 1：材料的取用与保存

 取用原则：“现用现取”，材料离体后尽快进行RNA提取。

 保存条件：液氮、-80℃冰箱、干冰。

 保存效果：液氮> -80℃冰箱>干冰。

 样品分装：按实验需求最小量保存多份，避免反复冻融。

【RNAlater是一种液态无毒的动物组织保存试剂。它能迅速渗入组织细胞中，通过高效的抑制RNase活性保护非冷冻细胞RNA，使其免受降解，从而使得在获得组织样品后，不必马上处理样本，也不必将样本冷冻在液氮之中，而更方便后续实验操作。使用组织RNA保护液，可免去使用液氮或超低温冰箱的不便，而且把不同批次的组织标本存放在该保护液中，能立即终止并固定 RNA 表达的时序变化，可以减少实验组间误差。

RNAlater可广泛应用于多种脊椎动物样本，包括脑、心、肾、脾、肝、肺。新鲜非冷冻组织按1:10比例浸入Buffer RNAlater后，样品可在常温保存1周、37℃保存1天，4℃至少保存1个月；组织4℃浸泡处理后可以在-20℃或-80℃长期保存。】

Point 2：实验器具使用

在RNA提取过程中凡是与RNA接触到的器皿都必须是RNase-free的，具体可通过以下两种方式获得：

DEPC处理失活RNase：用含有DEPC的水浸泡实验器皿失活RNase，然后进行高温灭菌。

直接购买RNase-free的实验耗材：适用于经费充足的实验室，放心可靠。

【RNase Eraser是一款新型RNase清除剂，能够快速有效的去除空气 、固体表面RNase的污染，保证RNA相关实验的顺利进行】

Point 3：提取方法选择

RNA提取最常用的是TRIzol法和试剂盒法，二者各有优劣，可根据研究目的进行选择。

试剂盒法：

优点：操作简单、入门容易，新手必备。

缺点：柱提取法提取的RNA有长度的局限性, 小RNA在提取过程中容易丢失。另外，不同的试剂盒适用物种不同，使用时需谨慎选择。

TRIzol法：

优点：提取成本低，适用物种广泛，操作者可根据不同实验材料的特点灵活调整实验步骤达到最优的提取效果，适用于经验丰富的科研老司机。

缺点：操作步骤繁琐、耗时长。

植物总RNA提取试剂盒	RE-0501T/1/2/3	5/50/100/200 preps
多糖多酚植物总RNA提取试剂盒	RE-0502T/1/2/3	5/50/100/200 preps
动物组织/细胞总RNA提取试剂盒	RE-0301T/1/2/3	5/50/100/200 preps
动物组织miRNA提取试剂盒	RE-0101T/1/2/3	5/50/100/200 preps
血清/血浆miRNA提取试剂盒	RE-0111T/1/2/3	5/50/100/200 preps
病毒RNA提取试剂盒	RE-0201T/1/2/3	5/50/100/200 preps

Point 4：实验人员操作

提取RNA时应配戴口罩和手套，避免皮肤上的RNase污染样品。

实验过程遵循操作快、加样准的原则。

建议提取经验不足的实验人员避免一次性操作几十个RNA样品，容易造成不同样品间的平行性差，另外，操作时间增长也会增加RNA降解的风险。

Point 5：RNA实验环境搭建

最好搭建RNA专用的实验环境包括实验台和离心机等，减少不同实验环境下RNase的交叉污染。

避免将RNA长时间暴露于高温环境。通常情况下，RNA 分子自身常常发生折叠形成稳定二级结构，避免被降解，高温环境有助于RNA分子二级结构的打开，使RNA变得不稳定，因此要避免。

为什么RNA品质很重要？

RNA降解后产生不同长度的片段，利用poly A富集方法进行建库，即使抓住了3’端poly A尾也无法获得完整的mRNA- 5’端，后续的测序数据也会因为降解而产生偏差。

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