试剂耗材 | 你应该了解的血清知识大全

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。

主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。

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重点介绍：

胎牛血清

胎牛血清是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。

显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

新生牛血清

新生牛血清取白出生6h内的小牛 的血制成的血清。新生牛血清中营养丰富，蛋白含量和各种 生长因子较高，价格较胎牛血清低得多，是目前动物细胞培养 中最常用的血清。

●提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。

●提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

●提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

●提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

●对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。

血清应保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃，实验显示非常容易产生沉淀物。

2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生

3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

5、若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?　欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

一般是以56℃，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

加热可以灭活补体系统。激活的补体会参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究、培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

实验显示，热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经过处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至可能因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率的降低。经过热处理的血清，沉淀物会显著地增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此若非必须，无需对血清进行热灭活处理。

热灭活时请将血清置于56℃水浴30分钟。为尽量减少热灭活对血清品质的影响，一次灭活的血清体积不宜过大。最好准备同样的容器装相等体积的水（与血清相同温度），灭活时将装有血清和水的容器同时放入56℃水浴，在装水的容器中放置温度计，加热过程中不时轻轻旋转混匀血清，当温度计显示达到56℃左右，才开始计时。

（1）需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.

（2）热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.

（3）瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡）,使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.

（4）一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.

（5）血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.

（6）切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量.