晋城冰箱价格联盟

浅谈实验室细菌菌种的保存

楼主:检验剪报 时间:2020-10-18 16:31:22

 在微生物学、环境科学、分子生物学、毒理学、酶学、疫苗制备、药品生产等等领域的实验过程中,都需要应用各种细菌,储备标准菌种、参考菌种、特殊菌种是必不可少的,下面就几种实验室菌株的保存方法简述如下。 
    1  斜面低温保存法

    将分纯的待存菌接种于适宜的固体斜面培养基上,得到充分生长后,用封口膜封口,贴上标签,保存于4℃的冰箱中。此法操作简单、使用方便、不需要特殊设备,是实验室菌种保存最常用的方法。但保存时间短,一般每个月都要移种1次,而且菌种容易变异,所以此方法只适合实验室短期实验菌株的保存。

    2  半固体琼脂法

    用接种针将以分纯的待存菌,穿刺接种于半固体中,放入培养箱培养后取出,封上无菌的液体石蜡,贴上标签,放4℃冰箱保存。此方法简便易操作,不需特殊设备、技术难度不大,但保存的时间不长,一般只能保存1年以内,而且对抵抗力弱以及一些特殊菌种大概只能存活3~6个月,需要频繁的传代,这样很容易使菌株受到污染、变异。所以此方法不适用菌种的长期保存,只适合实验室一些要求不高的菌种的短期保存。

    3  液体石蜡保存法

    将液体石蜡灭菌,放于37℃恒温箱中,使水汽蒸发掉备用。再将已分纯的待存菌在最适宜的斜面培养基中培养,使得到健壮的菌体,用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡,注入已长好的斜面培养基上,用量以高出斜面1cm为准,将试管直立,贴上标签,置4℃下保存。此法制作简单,不需要特殊设备,菌种可以保存1年左右不需要经常移种,缺点是保存的时候需要直立放置。此方法适合实验室短期菌株的保存,而且保存时需要一定的空间[1]。

    4  高层半固体琼脂石蜡保存法

    将待存菌经平板划线分离后,挑单个菌落用接种针反复穿刺接种到高层半固体琼脂培养基中,经培养箱培养后取出,用灭菌过的液体石蜡滴加到半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度,贴上标签,存放4℃冰箱。此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌株1~2年。所以适合实验室菌株的较长期的保存[2]。

    5  纸片法

    将已分纯的待存菌用无菌镊子镊取纸片,在纸片上刮取4~5个菌落,放入冻存管内,盖上盖子后用封口胶布封住边缘,贴上标签,放入冰箱冷冻保存(-20℃左右)。此方法具有操作简单、不需特殊设备、经济实用、保存空间小等,而且保存时间至少2年,但对一些营养要求比较高的菌种,存活率不理想。所以此方法适合实验室一些营养要求不高的菌种较长时间的保存[3]。

    6  甘油液保存法

    将已分纯的待存菌接种于肉汤中,37℃培养18~24h,然后按5份肉汤溶液、2份甘油-生理盐水保存液的比例分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中,贴上标签,置-80℃~-20℃冰箱保存。此法操作简便,不需要特殊设备,效果好,可以保存菌种3年左右,无变异现象,而且此方法还可以保存一些要求较高的特殊菌种,适用范围广。所以此方法适合实验室普通菌种或特殊菌种的较长期的保存[4]。

    7  湿牛奶冻存法

    将待存菌种于各自生长良好的平板培养基上,经分纯后放入培养箱培养。用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔,再用无菌毛细滴管吸取菌悬液滴入菌种管球部,每管球部约有一半的菌液,之后火焰封口,贴上标签,保存于-20℃冰箱。此方法操作比较简便,不需特殊设备、不需要花费很多时间,而且保存时间大约3年,时间较长,不易变性,也不容易污染。所以此方法适合实验室菌种较长时间的保存[3]。

    8  蒸馏水保存法

    取灭菌蒸馏水6~7ml加于已接待存菌斜面培养基的试管内,用吸管研磨,洗下斜面上的菌苔,充分混匀,将此菌液分装于灭菌的螺旋小瓶中,或用胶塞密封,贴上标签,置于4℃保存。此法制作简单,不需要特殊设备,且不需要经常移种,而且可以保存数年,但要注意保存的时候需要直立放置。所以此方法适合实验室菌种的长期保存[4]。

    9  冷冻真空干燥法

    将待存菌分纯后,用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔,把菌悬液滴入菌种管后,在管口抽取少许棉花塞入管内细颈处,放入冰箱-40℃速冻40min,放入准备好的混有盐的冰中,接上真空泵,真空抽干呈粉末状,火焰封口,贴上标签,保存于-40℃冰箱。此法保存时间长,可达15年,不易变性,但需要专用仪器,一般实验室难以配备,而且过程复杂,操作难度大,需要较长时间才能完成。所以此方法适合具有条件的实验室菌种的长期保存[3]。

    10  小结

    综上所述,我们在做实验过程中或者短期保存菌种时,可以选择斜面低温保存法、半固体琼脂法、液体石蜡保存法、高层半固体琼脂石蜡保存法、纸片法,进行保存;如果需要较长时间的保存菌株,可以选择甘油液保存法、湿牛奶冻存法、蒸馏水保存法、冷冻真空干燥法保存菌株,其中冷冻真空干燥法需要实验室配备好相应的仪器设备。如果一些菌株营养要求比较高的话,可以选择甘油液保存法、冷冻真空干燥法保存。当然上述菌株保存的方法不是最理想、最方便的保存法,还需要我们不断的探索,不断的研究,找到一种或几种简单、方便、时间长的保存方法。

【参考文献】
  1 胡海林,郭维植.细菌实验菌种的保存及管理.福建医药杂志,2000,22(1):113.

2 陈秀英.菌种保存方法的比较.中国卫生检验杂志,2002,12(2):231.

3 叶迎春,赵世鸿,凌体淑. 3种菌种保存法比较. 中国误诊学杂志, 2004,4(3):386.

4 黄霞云.菌种保存方法的改进.广东医学院学报,1999,17(1):7.


转载自检验医学网


今日推荐阅读:

血培养

          操作规范之血培养

           血培养-时间的质量控制

           血培养常见报阳曲线分析

           血培养究竟有多重要

           关于血培养,你必须知道


微生物

          如何解读细菌学药敏检验报告

           图解:微生物鉴定操作流程

           微生物CLSI文件集锦(你想要的都在这里)

           什么是CLSI?

           建议收藏||金黄色葡萄球菌菌血症的临床处理(超详细)

           你需要了解的多重耐药菌

           肺炎链球菌的鉴定方法

           艰难梭菌感染的实验室检测技术及临床意义

           详解微生物报告结果

           微生物培养注意事项

           规范报告 微生物药敏(一)

           寄生虫图谱及识别要点

           为您递上一份负责任的微生物学报告,请查收


在后台回复相关关键字(如血培养、寄生虫图谱等)可查看相应精彩内容哟



朋友 图片 表情 草稿箱
请遵守社区公约言论规则,不得违反国家法律法规