食品微生物监测技术和实验室质量管理问答荟萃(12)

tangyinming381
请问：用GB4789。30-2010 检单增李斯特菌，用VITEK 2 代替生化鉴定后，还用不用做协同溶血试验？

Leizhw
GB 4789.30-2010
6 结果与报告
综合以上生化试验和溶血试验结果，报告25 g（mL）样品中检出或未检出单核细胞增生李斯特氏菌。
我认为需要做“cMAP”

anan75
有问题请教：标准菌株每次传代是否都需做确认试验？确认试验做镜检和生化鉴定两项是否可以？另外菌种的保存记录、传代、使用及灭活记录是否可以用电子版的形式体现？如果可以的话，人员签名怎么处理呢？

Leizhw
1、标准菌株每次传代是否都需做确认试验？
----不一定。如果对菌株的背景不清楚，或超过5代，是需要进行确认实验的，反之，对于背景清楚的标准菌株，5袋内工作菌株是不必进行确认实验的。
2、确认试验做镜检和生化鉴定两项是否可以？
----确认试验，一般是指关键诊断指标试验，除了“镜检和生化鉴定”，还应至少包括血清诊断试验、选择性分离试验等等。
3、菌种的保存记录、传代、使用及灭活记录是否可以用电子版的形式体现？如果可以的话，人员签名怎么处理呢？
----可以的，但电子贮备要符合CNAS-CL 01、5的规定；
----关于签名，可电子签名啊。。

Zongshanying
想 请教您一个问题。关于微生物检测原始记录中培养时间如何规范表述。我们的原始记录上面，一开始培养条件表述为：——度，培养——h.后来评审时，评审专家 开出我们原始记录信息涵盖不全的不符合项。我们把原始记录改为例如：BPW培养条件：_℃，开始时间_，结束时间_；但面对大批量的样品，实验室的工作量 太大了。而且我认为微生物的培养时间没有必要精确到几点几分，毕竟不是影响数据结果的一个关键量值。后来我查看了一些检测机构的原始记录，基本上也是：温 度：_ 度，时间：_h.想听听您的意见，非常感谢。

Leizhw
1、评审专家开出“原始记录信息涵盖不全”的不符合项，我个人认为此不符合项表述欠佳，应客观、明确相关内容；
2、 你们“把原始记录改为例如：BPW培养条件：_℃，开始时间_，结束时间_；但面对大批量的样品，实验室的工作量太大了”，似乎信息还是不全。故建议你 baidu一些相关表格，对比找出问题所在，并规范整改，另一方面，如果方便，把你们的原始记录“晒”出来，我看看后才能知道其复合性。

yucg1
我想咨询一下，碳酸类饮料的微生物测试，膜过滤法和国标法这两种方法你觉得做出的结果应该有区别吗？

Leizhw
你为什么不亲自实践实践？理论上不会有很大区别，但“严重”建议使用膜过滤系统。

Detin
雷 老师，还要向您请教一个CL09-2013的问题就是，条款5.6.2.2.2  c 中菌种生存条件是指什么条件？貌似也包括的 b 菌种生长的培养基及孵育条件；不知道我这种理解是不是有失偏颇。但很显然菌种的生存条件是一个更大的概念范畴！对于一般微生物检测实验室而言，却又找不出 除菌株培养、孵育、保藏之外的其他因素，恳请赐教。

Leizhw
你的解读很对。
-------规范的菌种提供者，随菌种寄送一份包括生存条件（）的说明书；
-------如果难以方便获得，BAIDU1吧。对于一般微生物检测实验室而言，熟悉菌株的培养、孵育、保藏等因素即可。

Detin
请教一下CL09-2013 中  5.3.2 c) 应定期使用生物指示物检查灭菌设备的效果并记录，有没有什么法规技术文件，对定期的期限作出规定，我们在制定监测周期时，也好有章珂循。
我们这里化学指示剂每次灭菌都要带，生物指示剂说法不一，有1年，半年，1季度，1个月的，但真正落实起来，那个更有说服力呢，关键是有没有技术法规中有相应规定

Leizhw
---WS/T 367 、GB/T 15982等规定了“使用生物指示物检查灭菌设备的效果并记录”；
-- 确定“定期”的条件时确保良好灭菌效果。对于定期，难以统一规定，一方面灭菌设备种类规格较多，另一方面各检测室灭菌设备的年限不一样，故“定期”是由每 个实验室在“综合分析”基础上自定，很多实验室定为每个季度一次，然而如果空白试验发现“阳性”，或使用期较长，或故障修理后， 或...........，此时频次就要提高，反之可放宽频次，如每6个月一次。

wfj0808
还有个问题请教下您，按Cl09 要求，标准菌株要做质控，要定期核查它的存活度和纯度，我们每年也在做，纯度主要使用生化鉴定仪，会有菌株纯度的信息，但很多企业实验室没有相关的生化鉴定设备，他们该如何对菌种的纯度做鉴定呢？有没有好的方法呢

Leizhw
按Cl09 要求，标准菌株要做质控，要定期核查它的存活度和纯度，我们每年也在做，纯度主要使用生化鉴定仪，会有菌株纯度的信息，但很多企业实验室没有相关的生化鉴定设备，他们该如何对菌种的纯度做鉴定呢？有没有好的方法呢
----挑几个菌落，使用生化鉴定仪或“特异性”较强的生化试验（如关键诊断指标）进行测试，比较结果的一致性。
----此外还可综合考虑革兰氏染色、琼脂平板上的菌落形态等等

cathine505
关 于洁净室测试向您请教一个问题，沉降菌检测是分细菌和真菌的吧，而一般标准中的限值都只列出沉降菌没有指明是细菌还是真菌，如GB/T 16294-2010附录C中列出的限值，另外在GB 50687-2011《食品工业洁净用房建筑技术规范》中所列限值也只是沉降菌，那这些限值对应的是细菌和真菌之和还是分开的呢？
这个问题我们在外审曾被开过不符合项，专家要求要细菌和霉菌的分开来做，细菌的TSA，霉菌的用SDA，分别按照标准评判，仔细研读标准，也是有相关说明的

Leizhw
细菌和真菌之和
GB/T 16294-2010 和 GB 50687-2011都进行了明确规定，故应该执行之，即应该使用TSA和SDA同时分别测试。-------------以下几点，顺便商榷：
1）TSA的营养成分比SDA丰富，SDA中亦无抗生素，pH不同，我个人认为如果洁净室环境中如果有真菌，其可在TSA上生长；
2）GB/T 16294-2010适用于医药工业洁净室，GB 50687-2011适用于食品工业洁净室。对于食品微生物检测而言，主要检测对象是细菌，故一般情况下没有关注真菌，然而如果真菌检测业务量比较大，应该关注的，并予以监控。

wfj0808
请 教一个问题困扰我许久，不知怎么理解，GB4789.1中规定冷冻食品应在45度以下不超过15分钟，或2-5度不超过18小时解冻后检验，其中45度以 下，如若环境温度较低，又要快点实施检验，能否在培养箱或干燥箱等加温设备中进行加温不超过45度解冻啊，一直没敢这么做过，怕引起样品污染，不知大家着 急检验的话是怎么做的？
另外，2-5度解冻18小时，会不会影响副溶血性弧菌的检出率，因为该菌在此温度下不易存活啊

Leizhw
如果样品袋为完好塑料袋（注：如果包装不是加号塑料袋，应置于无菌完好塑料袋内！！），则要放在45度高速循环水水浴锅中15min。
否则，要放在冷藏冰箱中缓化。
副溶血性弧菌2-5度在不易存活的前提条件是“长时间”。
2-5度解冻18小时对副溶血性弧菌检出率的影响是有限的。
wfj0808：谢谢雷老师，在室温放置融化一旦超过15分钟就不允许了吗？如果45度以下，15分钟内不能融化的，必须拿去冰箱缓化是吗？
Leizhw：是的，不允许！不需要完全融化。45度以下能“第二次取样”即可。

glhaha0818
想问下 如果做生产用水的大肠菌群，如果按照GB/T 5750.12-2006是一个方法，但是要是按SN标准验食品大肠菌群时，把水当作一种液体做完全是另外一种方法，如果采用sn法是否可行。

Leizhw
GB/T 5750.12-2006的检测基质是“水”，SN/T 0169检测基质是“食品”。
使用SN 0169检测 本应使用GB/T 5750.12方法检测的 大肠菌群，不能武断说不可，但属于方法偏离，使用SN/T 0169检测水中的 大肠菌群之前需要做四件事：
1、偏离方法确认，要证明SN/T 0169与GB/T 5750.12之间没有显著性差异；
2、形成作业指导书；
3、贵实验室的主管签字批准；
4、客户同意